炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究
吕文海1，邱福军2，王作明3
（1、山东中医药大学，山东 济南 350014；2.中国药材公司，北京 100062；3、山东省委医院，山东 济南250001）
[摘要] 目的：比较水蛭煎剂、普通散剂的药效以及新法炮制与超微粉碎对其药效的影响。方法：用BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定了生、制水蛭超微散的粒度。通过小鼠抗凝血、抗血栓作用，比较了水蛭丝水煎剂1/2煎剂剂量的普通散、超微散、制水蛭超微散的药效。并对其安全性进行了考察。结果：供试品药效由强到弱为制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎剂、对照组。结论：水蛭经超微粉碎，尤其是新法炮制后超微粉碎，可明显改善气味、口感，提高药效。
[关键词] 水蛭；新法炮制；超微粉碎；增效
[中图分类号] R283.1 [文献标识码]B[文章编号] 1001-5302（2001）04-0241-04
水蛭作为经典的破血逐瘀药，近代在中医临床与中成药生产中得到了愈来愈广泛的应用，并成为了一种世界性药物。经前期工作，初步证明水蛭的主流药用品种为蚂蟥（宽体金线蛭Whit mania pigra Whit man）；切丝入药优于《药典》规定的切段入药；生用在活血化瘀等药效方面，优于传统烫制品；按新法制成的制水蛭能在改善原药气味的同时，较好的保存其内在成分，且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循环、降胆固醇等药效学指标，均优于传统烫制水蛭，部分指标也优于生水蛭，有保质增效的趋势[1]。但水蛭在临床应用中入汤剂味劣难服，易反胃败胃。临床中亦有研末或装胶囊吞服效优的经验。
近几年由于超微粉碎技术的发展，可达到使动、植物细胞90%以上破壁的细度。由于粒度的减小，也有利于改善药物的气味及服用口感。鉴于水蛭经炮制和超微粉碎后有无药效与应用方面的优势，未见报道，笔者对此作了初步的实验研究。
1实验材料
1.1供试材料
水蛭购自山东省立医院，经李定格、李峰老师鉴定为蚂蟥（宽体金线蛭Whit mania pigra Whitman）。
1.2供试品制备
水蛭丝：原药材挑去杂质，擦净，盖湿纱布略润后切2~3mm细丝。在切制过程中发现，部分药材中间填充有白色结晶性粉末，口尝无咸、涩味、初步印象为石膏，切丝晾干后过筛可大部脱落。经紫外灯照射45min后密闭备用。
生水蛭水煎液：净水蛭丝2.6g，加10倍量水浸泡30min，微沸30min，过滤，药渣加8倍量水，微沸30min，过滤，合并滤液，定容100ml，浓度为26˙ml-1。
生水蛭普通散：净水蛭丝经粉碎研磨过100目筛。
生水蛭超微散：净水蛭丝经SQW-6型三清微粉机粉碎。出料温度35~40℃。
制水蛭超微散：净水蛭丝酒润麸制炮制后，SQW-6型三清微粉机粉碎。出料温度同上。
3种散剂均平铺一薄层，经紫外灯照射45min后，密切保存备用。
1.3 实验动物与仪器
昆明种小鼠（山东中医药大学动物房提供）：SQW-6型三清微粉机；BT-1500型离心沉降式粒度分布仪。
2 实验方法与结果
1.1水蛭超微散粒度的测定
按《药典》规定，水蛭普通散的粒度为（150±6）?m。生、制水蛭超微散的粒度经BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定，结果见表1、表面化。实验表明，生、制水蛭经微粉机粉碎，可使其中位径分别达到10.24?m和7.79?m；zui大粒径分别为72?m和24.81?m；50%的粒度在10?m和8?m以下，90%的粒度在50?m和23?m以下，确能达到超微的效果，而且经新法炮制后更利于粉碎，其粒度明显小于生水蛭。
表1生水蛭超微粉粒度分布测试结果
粒径 区间频率 累积频率
/?m /% /%
0.00~1.00 3.33 3.30
1.00~2.00 4.70 8.80
2.00~3.00 4.93 12.93
3.00~4.00 5.38 18.32
4.00~5.00 5.27 23.59
5.00~6.00 4.71 28.30
6.00~7.00 5.40 33.70
7.00~8.00 5.79 39.49
8.00~9.00 5.50 44.99
9.00~10.00 4.23 49.22
10.00~11.00 3.86 53.08
11.00~12.00 0.72 53.80
12.00~13.00 0.00 53.80
13.00~14.00 0.78 54.58
14.00~15.00 3.15 57.73
15.00~20.00 10.59 68.31
20.00~30.00 20.19 88.50
30.00~40.00 1.13 89.63
40.00~50.00 1.02 90.65
50.00~60.00 6.19 96.84
60.00~70.00 3.05 99.89
70.00~72.00 0.11 100.00
72.00~73.00 0.00 100.00
73.00~74.00 0.00 100.00
注：中位径10.24?m zui大粒径72?m
2.2 供试品对小鼠凝血时间的影响取体重（28±3）g的成年雄性小鼠，随机分为5组。水蛭煎剂组以0.4mg˙g-1剂量灌胃。3种散剂组每天灌胃临时配成13mg˙ml-1的混悬液，以0.2mg˙g-1的剂量灌胃（煎剂的1/2量）。用生理盐水作对照。每天3次，连续给药3d ,第4天给药1h后，从小鼠眼内毗球后静脉丛取血，按毛细管法[2]，测定各组小鼠的凝血时间，经t检验统计分析，结果见表3。实验表明，水蛭煎剂与水蛭散剂均有确切的抗凝活性。1/2剂量的散剂，其抗凝效果优于汤剂。超微散的抗凝活性有优于普通散的趋势，制水蛭超微散又明显优于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增强其抗凝活性。
表2 制水蛭超策粉粒度分布测试结果
粒径 区间频率 累积频率
/?m /% /%
0.00~1.00 2.59 2.59
1.00~2.00 4.19 6.77
2.00~3.00 6.51 13.28
3.00~4.00 5.22 18.50
4.00~5.00 12.06 30.56
5.00~6.00 6.20 36.75
6.00~7.00 7.03 43.79
7.00~8.00 6.26 50.05
8.00~9.00 6.85 56.89
9.00~10.00 2.84 59.73
10.00~11.00 3.51 63.24
11.00~12.00 0.64 63.88
12.00~13.00 0.00 63.88
13.00~14.00 0.72 64.60
14.00~15.00 2.77 67.37
15.00~20.00 4.09 71.46
20.00~30.00 4.75 76.21
30.00~40.00 1.99 78.20
40.00~50.00 3.38 81.58
50.00~60.00 2.16 83.74
60.00~70.00 1.92 85.66
70.00~72.00 4.61 90.27
72.00~73.00 6.17 96.43
73.00~74.00 3.57 100.00
注：中位径7.97?m zui大粒径24.81?m
表3 供销试品对小鼠凝血时间的影响
组别 n 剂量 凝血时间 p
/mg˙g-1 /min
生理盐水 10 0.4 2.96±1.43
生水蛭水煎剂 13 0.4 4.95±2.32 ＜0.05（）
生水蛭普通剂 14 0.2 6.23±2.73 ＞0.05（）
生水蛭超微散 13 0.2 6.33±2.60 ＞0.05（）
制水蛭超微散 13 0.2 9.38±2.19 ＜0.01（）
注：（）示该组与上一组比较
2.3 供试品对小鼠出血时间的影响
取体重（28±3）g的成年雄性小鼠，随机分为5组。以上法相同剂量给小鼠灌胃3d，每天2次，第4天给药1h，用剪尾法[2]测定各组小鼠剪尾5mm的出血时间，结果见表4。实验表明，生水蛭水煎液与对照组相比，虽有作用增强的趋势但无显著性差异，而普通散剂组呈显著性差异，两种超微散均为极显著性差异，制超微散更优。
表4 供试品对小鼠出血时间的影响
组别 n 剂量 凝血时间 p
/mg˙g-1 /min
生理盐水 10 0.4 7.95±2.58
生水蛭水煎剂 10 0.4 10.28±3.19 ＞0.05（）
生水蛭普通散 12 0.2 14.32±7.08 ＜0.05（）
生水蛭超微散 12 0.2 15.42±5.09 ＜0.01（）
制水蛭超微散 10 0.2 16.45±4.55 ＜0.01（）
注：（）示与NS组比较
2.4 供试品对小鼠体内抗栓作用的影响
抗栓实验方法学研究认为，在（37±1）℃的生理盐水中，测定小鼠尾出血时间，与鼠颈动脉旁路血栓形成法具有很好的平行性。可作为一种简便易行的抗血栓形成药物的体内初筛法用于实验[3]。取体重（20±2）g的雄性小鼠随机分为5组，以给定剂量灌胃3d，第4天给药1h后，将小鼠固定，距尾尖3mm处剪断，垂直放放（37±1）℃生理盐水中，使尾端在液面下3cm，记录出血时间，结果见表5。实验表明，体内抗栓作用，也以超微散为优，但生、制品之间的差异不明显。
表5供试品对小鼠体内抗栓作用比较
组别 n 剂量 凝血时间 p
/mg˙g-1 /min
生理盐水 10 0.3ml 0.95±0.22
生水蛭水煎剂 10 0.390 1.09±0.25 ＞0.05（）
生水蛭普通散 12 0.195 1.24±0.59 ＞0.05（）
生水蛭超微散 10 0.195 1.66±0.76 ＜0.05（）
制水蛭超微散 10 0.195 1.69±0.53 ＜0.01（）
注：（）示与NS组比较
2.4对小鼠安全性的考察
水蛭经炮制和超微粉碎后药效有所增强，其毒性是否增大？为此考察了供试品对小鼠的安全性。取体重（20±2）g的健康小鼠80只，随机分为4组，1组给予1300/mg˙ml-1的水煎液，0.4ml/只，3次/d，1.56g˙d-1（相当于《药典》规定的成人每日汤剂服用量的200倍）。其余3组分别给予130/mg˙ml-1的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散0.3ml/只，3次/d，117mg˙d-1（此为能通过灌胃器的散剂zui大剂量，相当于《药典》规定成人每日服粉末量的30倍），给药后观察1周，结果小鼠活动、粪便、毛色正常，无死亡。每组平均体重增加6~8g，说明水蛭经新法炮制和超微粉碎后用药是安全的。该结果与前期工作和水蛭的亚急性毒性报道[4]相一致，支持临床中认为“水蛭系疗效的无毒品”的观点。
3 小结与讨论
3.1水蛭丝入药，既有利于其药物成分的煎 出，又有利于祛除水蛭体内人为掺入杂质，优于《药典》规定的切段入药。
3.2 生水蛭经超微粉碎，90%的粒度为普通散的1/4，50%的粒度为普通散的1/15，且颜色变浅，腥味降低，质地细腻，利于吞服。1/2煎剂剂量的抗凝血、抗血栓作用优于水蛭丝煎剂，肯定更优于《中国药典》2000年版规定的水蛭段煎剂，证明多数临床经验认为水蛭服散效优是正确的，利用超微技术将更有利于水蛭药效的发挥。
1.3水蛭经新法炮制后，有利于矫正其气味，超微粉碎后其粒度也小于生水蛭，zui大粒径为生水蛭超微粉1/3，仅为24?m。实验药效指标在3种散剂中呈*趋势，值得进一步深入研究及推广应用。
1.4虽然药物粒度的减小，有利于其溶解吸收并改善气味口感，但也会引起表面能和稳定性等方面的变化。制水蛭超微粉的稳定性及*粒度范围等问题，还有待于进一步研究。
1.5水蛭作为一种世界性药物，研究zui多的品种是日本医蛭（Hirude nipponica Whitman），而我国临床用药的主流商品是宽体金线蛭。该品种有效部位及有效成分的研究，目前几近空白。深入研究其成分，将有利于饮片质量的控制和炮制原理的研究，此类探索目前正在进行之中。
[参考文献]
[1]吕文每，王琦，武继彪，等.水蛭饮片炮制研究.中药材，1996.19（4）：294
[2]李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991.494.
[3]顾云，孟娟如.介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法.中国药理学通报，1991，7（4）：317
[4]陈小野，邹世洁.水蛭的医学研究概述.成都中医学院学报.1987，10 （5）：51.
